Dados do Trabalho

Título/Title/Titulo

Uso Da Latrunculina No Controle De Microorganismos: Aplicação Em Engenharia Celular

Introdução/Introduction/Introdución

A contaminação biológica em estufas de laboratório de cultura celular é um problema universal. A consequência dessa adversidade vai desde o comprometimento parcial das pesquisas até a perda da credibilidade da instituição. Para evitá-la, existem alguns produtos no mercado. Contudo, o uso desses compostos é contraditório nas publicações científicas e seu custo pode ser proibitivo. O aumento exponencial do uso das técnicas de cultivo de células animais em biomedicina impulsiona as pesquisas para solucionar o desafio de identificar e validar o uso de novas moléculas com ação sobre microrganismos. A Latrunculina é um composto com propriedades antibióticas extraído da Negombata magnifica, um porífero que habita o Mar Vermelho.

Objetivos - Metodologia - Resultados - Discussão dos Resultados/Objectives - Methodology - Results - Discussion of Results/Objetivos - Metodología - Resultados - Discusión de los resultados

Objetivo: A proposta desta pesquisa é avaliar o desempenho da Latrunculina, estimando sua concentração inibitória mínima, frente a um painel de fungos e bactérias ambientais mais prevalentes em ambientes laboratoriais de cultura celular analisando curvas de crescimento de diferentes tipos de células animais após a exposição à Latrunculina. Metodologia: Este projeto teve início após aprovação do comitê de Ética em Pesquisa (CAAE: 71393417.8.0000.5411). Transcorridos os trâmites de autorização legal e ética foi realizado o monitoramento diário das culturas celulares como previsto nos Procedimentos Operacionais Padrão dos dois Laboratórios Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu e do Centro de Venenos e animais Peçochentos – Cevap, com a parceria com o Laboratório de Microbiologia do Instituto de Biociências da UNESP de Botucatu, com expertises nas áreas de fungos e bactérias. A coleta de material foi diferenciada. Após a observação e suspeita de contaminação, fúngica ou bacteriana, as placas e ou frascos de cultura foram isolados no laboratório de Quarentena e transferidos para o Lab. de Microbiologia para a coleta específica de cada material. Os fungos contaminantes foram coletados levando em consideração os estágios intermediário e avançado de contaminação, provenientes de pesquisas desenvolvidas nos laboratórios alvo. A coleta ocorreu em dois laboratórios distintos: Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu (LEC) e no Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) da UNESP. Resultados e Discussão: Foram identificados, caracterizados por métodos clássicos e por biologia molecular os seguintes fungos: Aspergillus niger, Penicillium capsulatum, Aspergillus versicolor e Candida parapsiloses. A Concentração Mínima Inibitória (MIC) foi realizada comparando-se com anfotericina B e fluconazol (antifúngicos tradicionalmente utilizados na cultura celular) com Latrunculina A, A sintética e B. Para a realização da citotoxicidade foram utilizados os kits de anexina V e iodeto de propídeo pelo método de citometria de fluxo. As análises evidenciaram que não houve alteração do controle auto-fluorescente quando as células foram expostas às concentrações de 5,10 e 100nM. O controle basal evidenciou, como esperado, alta taxa de apoptose e necrose.

Considerações Finais/Final considerations/Consideraciones finales

Conclusão: Observou-se que a exposição à Latrunculina A, A sintética e B controlou os processos de necrose celular com uma diminuição de 3 X em relação ao controle. Estes resultados apontam que a Latrunculina natural ou sintética pode ser usada como antifúngico e no controle das metástases.

Palavras-chave/Key words/Palabras clave

Concentração inibitória; Controle de qualidade; Latrunculina A/B; Cultura celular.