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Dados do Trabalho


Título/Title/Titulo

Entendendo o microambiente cardíaco: caracterização do secretoma de células-tronco embrionárias durante a diferenciação cardiomiogênica in vitro

Introdução/Introduction/Introdución

Avanços nas terapias celulares têm demonstrado que muitos dos efeitos observados são consequência da secreção de fatores parácrinos pelas células implantadas. Assim, algumas abordagens vêm sendo pesquisadas na busca por uma terapia livre de células. Porém, inicialmente, é preciso aprimorar os conhecimentos a respeito dos nichos teciduais para entender como os fatores influenciam as células locais. Neste sentido, há grande interesse em entender a composição dos diferentes nichos (compostos principalmente de fatores solúveis e matriz extracelular-MEC) e como estes podem modular as respostas de diferentes tipos celulares. Com relação ao nicho cardíaco, ainda existem vários aspectos que precisam ser elucidados, como, por exemplo, a caracterização dos sinais secretados que podem modular o comportamento das células progenitoras do coração. Para entender o microambiente cardíaco, uma das alternativas é caracterizar as moléculas secretadas durante o processo de diferenciação cardiomiogênica, permitindo a identificação de potenciais moléculas que possam contribuir para o reparo de um tecido lesionado.

Objetivos - Metodologia - Resultados - Discussão dos Resultados/Objectives - Methodology - Results - Discussion of Results/Objetivos - Metodología - Resultados - Discusión de los resultados

Assim, o objetivo deste trabalho é caracterizar o microambiente e as sinalizações celulares presentes durante o comprometimento das células-tronco embrionárias (CTEs) à linhagem cardíaca. As CTEs foram induzidas a diferenciação cardiomiogênica e, em diferentes pontos durante o processo (D1, D4, D8/D9 e D15 – referentes aos dias de diferenciação e surgimento de progenitores), foram coletados os meios condicionados (MCs) e a MEC. Esta última foi obtida através da descelularização dos corpos embrióides formados no processo de diferenciação cardíaca. A composição da MEC e dos MCs foi avaliada por espectrometria de massas e arranjo de anticorpos. Identificamos em torno de 40 proteínas de MEC moduladas nos diferentes tempos analisados e 20 fatores de crescimento e/ou citocinas nos MCs. Muitas destas proteínas estão relacionadas com o desenvolvimento embrionário normal e são necessárias ao processo de diferenciação celular. Estes resultados foram complementados com a análise de dados prévios de sequenciamento de mRNAs também obtidos durante a diferenciação cardiomiogênica. Por esta técnica, identificaram-se mais de 150 genes relacionados a proteínas extracelulares reguladas ao longo do processo de diferenciação. Funcionalmente, avaliamos os MCs em cultivo com células H9c2, células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo e células endoteliais, quanto a manutenção da viabilidade e a proliferação celular. Embora nenhum dos meios seja tóxico para os cultivos, observamos diferenças na resposta de um mesmo MC frente aos diferentes tipos celulares. Porém, para entender mais profundamente que tipo de alterações ou influências os MCs podem estar promovendo, novos ensaios são necessários.

Considerações Finais/Final considerations/Consideraciones finales

Este é o primeiro trabalho a caracterizar o secretoma durante a diferenciação cardiomiogênica in vitro. Acreditamos que as abordagens utilizadas neste trabalho fornecem ferramentas para o entendimento do microambiente cardíaco, uma vez que as caracterizações realizadas potencialmente contribuem com futuras investigações de proteínas ou vias de sinalização específicas que possam ser moduladas na tentativa de promover a regeneração do coração após lesão.

Palavras-chave/Key words/Palabras clave

Diferenciação cardiomiogênica, secretoma, células-tronco embrionárias, fatores solúveis, matriz extracelular.

Área

Celulas Tronco Pluripotentes

Autores

ANNY WALOSKI ROBERT KULIG, Isabela Tiemy Pereira, Bruno Dallagiovanna, Marco Augusto Stimamiglio