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Dados do Trabalho


Título/Title/Titulo

Análise da Contribuição do LED nos Comprimentos de Onda de 630 e 850nm em Diferentes Fluências na Cultura de Célula-Tronco Mesenquimal

Introdução/Introduction/Introdución

A Medicina Regenerativa (MR) é uma área em crescente expansão no Brasil e no mundo, a qual procura ampliar a capacidade natural de regeneração dos tecidos através da utilização de células, fatores de proliferação e biomateriais. Um dos ramos da MR é a terapia celular, vertente que utiliza células-tronco (CT), visando a substituição de tecidos funcionalmente ou estruturalmente lesados, apresentando um caráter terapêutico. Na medicina LASERs e LEDs (Light Emitting Diode) vem sendo estudados como ferramenta terapêutica, mostrando possuir capacidade bioestimulatória. Na técnica de fotoestimulação, utiliza-se a luz para ativar moléculas e funções celulares, apresentando o potencial de afetar a proliferação e diferenciação e o metabolismo da célula, estimulando a fosforilação oxidativa e podendo reduzir a resposta inflamatória local. Entretanto para que essa resposta ocorra, é importante a seleção de um comprimento de onda ideal, uma vez que a utilização de um comprimento inapropriado pode acarretar em resultados contrários aos esperados, como a bioinibição. A aplicabilidade do LED como agente bioestimulador tem sido proposta.

Objetivos - Metodologia - Resultados - Discussão dos Resultados/Objectives - Methodology - Results - Discussion of Results/Objetivos - Metodología - Resultados - Discusión de los resultados

Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a ação da luz contínua e pulsátil, 630nm e no regime pulsátil a 850nm, para ambos, nas doses de 1, 3, 5 e 10J/cm² avaliando a ação sobre células obtidas pelos métodos de dissociação mecânica (DM). Metodologia: Foram retirados blocos de tecido adiposo (TA) de ratos da linhagem Wistar com idade média de 3 meses. Para isolar e caracterizar as CT foi realizado o perfil fenotípico utilizando a técnica de citometria de fluxo com os marcadores CD90/CD44/CD71/CD31/CD11b/CD45. Estabeleceu-se a curva de confluência à 80% entre as passagens além da determinação das citocinas TNF, IFN-ɣ, IL-4 e IL-10. Foram realizados ensaios de micronúcleo e cometa para análise de mutagenicidade e genotoxicidade. Resultados e Discussão: O LED, emitindo luz em 630 nm, nas 4 doses aplicadas (1, 3, 5 e 10 J/cm2), sob luz contínua e pulsátil, determinam uma bioestimulação das CTMs cultivadas in vitro com evidente estímulo à proliferação celular. A análise do tempo de confluência a 80% (desdobramento) entre as passagens teve efetiva bioestimulação por influência do LED, em especial nas amostras de DM. Esta ação foi menos evidente nas amostras enzimáticas. Os marcadores imunofenotípico tiveram desempenho esperado. As citocinas identificadas no pós-experimento nas doses de 1 e 3 J/cm2foram IL-4 e IL-10 que possuem atividade anti-inflamatória. A análise de dano do DNA por genotoxicidade, realizada pelo teste cometa, evidencia a ação benéfica da luz no reparo de danos no DNA. No entanto, o regime de irradiação a 3 J/cm2 nos dois regimes de luz induziu ao dano de DNA. O dano de DNA (mutagenicidade) avaliado pelo teste do micronúcleo mostrou que as doses de irradiação de 1 J/cm2 contínuo e/ou pulsátil e 3 J/cm2 luz contínua induziram ao dano irreversível de DNA. Para o regime de 850nm, pulsátil, o desdobramento celular mais lento e acarretou na diminuição da confluência celular, especialmente nas doses de 5 e 10J/cm². Na cultura de linfoma Linfoblástico tipo B, em apenas 1 semana de exposição o mesmo comportamento de bioinibição foi encontrado na dose de 10J/cm².

Considerações Finais/Final considerations/Consideraciones finales

Conclusão: As técnicas de fotônicas podem ser usadas para bioestimulação ou bioinibição da linhagem Raji e CTM in vitro, na dependência do regime de luz apropriado.

Palavras-chave/Key words/Palabras clave

Célula-tronco mesenquimal, Terapia celular, Bioestimulação, LED.

Área

Mesenchymal stem cells/adultas

Autores

ANA LIVIA DE CARVALHO BOVOLATO, Heloisa Vicente Garcia, Ana Carolina Passian, Helga Caputo Nunes, Rosana Rossi Ferreira, Natália Inada, Vanderlei Salvador Bagnato, Márjorie de Assis Golim, Andrei Moroz, Elenice Deffune