Dados do Trabalho

Título:

ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇAO DE MARCADORES MICROSSATELITES E DESCRIÇAO DO MITOGENOMA PARA O MARSUPIAL GRACILINANUS AGILIS (DIDELPHIMORPHIA: DIDELPHIDAE)

Resumo:

Gracilinanus agilis é um marsupial de hábito noturno, solitário e escansorial, que apresenta dieta insetívora-onívora e é um importante agente dispersor de sementes. A espécie pode agir como agente de controle biológico em áreas próximas a campos agrícolas, sendo ainda um importante reservatório selvagem de agentes patogênicos de interesse para a saúde pública e veterinária. Apesar de não ser considerada uma espécie ameaçada de extinção, localmente ela pode encontrar-se em perigo devido à destruição e fragmentação do habitat que ocupa, principalmente em função da expansão da fronteira agrícola. Os loci microssatélites e mitocondriais estão entre os principais marcadores moleculares utilizados em estudos de genética populacional e análise de parentesco, sendo uma importante ferramenta para o conhecimento da história natural e para avaliação do status de conservação desta espécie. Neste trabalho descrevemos o isolamento e a caracterização de loci microssatélites e recuperamos o genoma mitocondrial de Gracilinanus agilis utilizando sequenciamento de alto rendimento. Para tanto, realizamos o sequenciamento parcial do genoma de um indivíduo da espécie utilizando a plataforma HiSeq2500 Illumina, o que resultou em um total de 2.331.566 paired-end reads. Destes, cerca de 1.480 foram alinhados a um mitogenoma de referência da própria espécie, resultando em um mitogenoma parcial (sem a região controle) de 15.467 bp. Em relação aos microssatélites, após a aplicação de parâmetros de filtragem foram encontrados um total de 4.192 loci, sendo possível o desenho de pares de iniciadores (primers) para 207 deles. Selecionamos e testamos 26 loci tri e tetranucleotídeos utilizando PCRs multiplex em 30 indivíduos de diferentes populações. Destes, 15 loci foram amplificados com sucesso e exibiram altos níveis de variação genética. O número de alelos variou de 2 a 15 (média de 7,73 alelos por locus), a heterozigosidade observada média foi de 0,63 e a heterozigosidade esperada média foi de 0,72. O teste de desequilíbrio de ligação não foi significativo para nenhuma das comparações entre os pares de loci, enquanto que quatro loci apresentaram evidência significativa de presença de alelos nulos e três apresentaram desvio significativo do Equilíbrio de Hardy-Weinberg. Em conjunto, os 15 loci analisados apresentaram alta probabilidade de exclusão de paternidade (0,999) e baixa probabilidade de identidade (3,45 x 10-16). O alto nível de polimorfismo, a alta probabilidade de exclusão e a baixa probabilidade de identidade indicam que os loci isolados possuem um grande potencial para a realização de estudos relacionados à determinação do parentesco genético, exclusão de paternidade/maternidade e avaliação da estratégia reprodutiva utilizada pela espécie. Além disso, os marcadores microssatélites e o mitogenoma aqui apresentados podem ser utilizados em estudos de genética populacional, filogeografia e análises filogenéticas, contribuindo sobremaneira para uma compreensão mais aprofundada sobre os processos demográficos, ecológicos e evolutivos envolvidos na origem e manutenção da diversidade genética presente em Gracilinanus agilis.

Palavras-chave: microssatélites, DNA mitocondrial, parentesco, diversidade genética, heterozigosidade

Financiamento:

FAPDF (Proc. No. 0193.001071/2015 e Proc. No. 193.000914/2015)

Área

Genética