Dados do Trabalho

Título:

IDENTIFICAÇAO MOLECULAR DE ESPECIE INVASORA DE CERVIDEO (AXIS AXIS)

Resumo:

O chital (Axis axis) é uma espécie de cervídeo de médio porte, chifres exuberantes, encontrado em grupos de até 200 indivíduos habitando diferentes formações florestais. A espécie é originária da península indiana, mas no início do século passado passou introduções em outras regiões, incluindo o sul do continente sul-americano. Desde então, tem ocorrido a expansão geográfica da espécie, que já pode ser encontrada nos estados da região sul do Brasil. Atualmente existe uma metodologia genética de identificação de cervídeos neotropicais de ocorrência no Brasil estabelecida para amostras forenses (fezes, osso, carcaça), com amplo uso em amostragens não invasivas utilizando DNA fecal. Entretanto, esta metodologia não foi testada para outras espécies de cervídeos. O objetivo deste trabalho foi testar o uso de uma pequena sequência de DNA mitocondrial para a identificação de Axis axis, adicionando a espécie dentro do contexto de identificação das espécies nativas. Para tanto, realizamos um ensaio de amplificação in silico de um fragmento de 224pb do gene Citocromo B (CytB), e testamos a identificação através do corte com enzimas de restrição e do posicionamento filogenético perante as espécies brasileiras. Foi realizada uma busca de sequencias Genebank com as palavras chaves “Axis axis” e “Cytochrome b”, gerando 162 resultados. Após download e inspeção visual das sequencias, foi realizado o alinhamento destas junto com uma matriz de 980pb e 36 sequencias contendo as espécies de cervídeos brasileiros. Em seguida, foi feito o alinhamento desta matriz com os primers IDMAZ224L e IDMAZ224H gerando um amplicon de 224pb a ser utilizado nos testes. A análise filogenética foi realizada através do método de inferência bayesiana no programa BEAST v2.6.7, com o melhor modelo evolutivo GTR +I, escolhido através do modelo de seleção BIC gerado pelo programa JmodelTest 2. Para a avaliação dos sítios de corte enzimático foram utilizadas três enzimas New England Biolabs® (SspI, AflIII e TaqI) que foram testadas com os quatro haplótipos representativos das sequencias de Axis axis utilizadas na análise filogenética, através da ferramenta NEBcutter® v.3.0.15. O resultado da árvore bayesiana recuperou a espécie invasora como um grupo monofilético em relação aos cervídeos brasileiros com probabilidade posterior de 0,96. As enzimas apresentaram os mesmos sítios de corte nos diferentes haplótipos, sendo a utilização da TaqI suficiente para identificar a espécie. Esta enzima apresentou dois sítios de corte para os haplótipos nas posições 44/46 e 71/73, o que gera três pequenos fragmentos passíveis de visualização em gel de agarose, diferentemente dos outros cervídeos que possuem apenas um sítio de corte, resultando em dois fragmentos para esta enzima. Este ensaio mostrou que o fragmento de 224pb de CytB é eficiente para identificação da espécie invasora através de amostragem não invasiva com a utilização DNA obtido em amostras forenses como fezes, carcaças, carne de caça e animais atropelados e deve contribuir para o seu monitoramento. Ressaltamos a importância do teste empírico e sequenciamento de amostras da população invasora para corroboração do método aqui proposto.

Palavras-chave: Axis axis, Citocromo B, Cervidae, espécie exótica, genética forense.

Financiamento:

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP nº. 2019/07655-9)

Área

Genética